发布日期：2018-11-12 09:41 来源：活性炭网 作者：活性炭网 浏览数：
非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）正在成为世界上最常见的儿童慢性肝病之一，但尚未获得食品和药物管理局（FDA）批准的治疗方法。 以前的研究报道，端粒和端粒酶参与NAFLD的发展和进展
在中国的沿海地区，非酒精性脂肪肝病（NAFLD）已成为中较高的现代生活水平的最常见的疾病之一，更好的饮食结构，加速老化和先进的医疗卫生事业[ 1，2 ]。流行病学数据表明，在外国成年人中，NAFLD的发病率为20％至33％[ 3 ]，而全世界健康儿童的发病率为3％至10％[ 4 ]。中国儿童脂肪肝的发病率约为2％~4％[ 5 ]。大多数NAFLD是由高脂肪饮食引起的，并且在智能手机上瘾者和运动受限的个体中很常见。据报道，中国约有800万儿童患有NAFLD。
如在成年人，NAFLD涉及儿童从简单的脂肪肝变性到非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的一系列的肝脏病理变化，肝纤维化和肝硬化[ 6 - 8 ]。近年来，NAFLD已成为世界上最常见的儿童慢性肝病之一，其发病率得到证实[ 9 ]，因此受到越来越多的关注。
N-乙酰半胱氨酸（NAC）是还原型谷胱甘肽的前体，其可以提高细胞内谷胱甘肽的生物合成，并抑制由氧自由基和自抗氧化[失衡引起的氧化应力10，11 ]。在临床应用中，NAC表现出良好的功效，包括抗肝纤维化，预防和治疗脂肪肝的，肝内循环的改进，和异常肝功能指标[ 12 - 17 ]，但是NAC可导致几个不良反应，例如高剂量，强烈的首过效应，低生物利用度和快速新陈代谢。然而，具有开发的多孔结构，高比表面积，良好的吸附性能和生物相容性的优点[[18 ]，用于医疗目的的活性炭有可能显着促进化合物的持续释放，从而改善作用时间和生物利用度[ 19 ]。在先前的研究，ACNAC通过有效NAC具有药用活性炭通过正交实验[组合来制备20 - 22 ]。在体外和体内研究已表明，ACNAC可能减慢NAC的释放，从而提高了NAC的稳定性和增强的保护作用[抗肝纤维化和抗氧化效果12，13，23，24]。端粒由重复DNA序列组成，位于染色体末端并在有丝分裂期间缩短，并保护染色体尖端[ 25 ]。端粒和端粒酶发挥发病中起重要作用和肝脏疾病独立于底层的病因[的进展26，27 ]。端粒在肝病发病机制中的作用可以解释如下：在NAFLD的情况下，触发因素，如肥胖和胰岛素抵抗，诱导慢性肝损伤和再生的病症，其特征在于进行性肝细胞端粒缩短和衰老[ 28]。因此，在本研究中，我们评估了ACNAC对断奶期间非酒精性脂肪性肝炎Sprague Dawley（SD）大鼠高脂肪饮食（HFD）诱导的肝细胞端粒和端粒酶的影响。我们还研究了ACNAC的作用机制，基于减少剂量，减少副作用和对儿童生理特征的良好疗效。
64只断奶雄性Sprague Dawley（SD）大鼠（45-60g）购自浙江省医学科学院动物中心（动物许可证编号SCXK（Zhe）2014-0001）。在整个实验过程中，将大鼠保持在维持在22±1℃，12小时光照/ 12小时黑暗循环的环境中，并且可以随意获得标准商业饮食和水。所有实验均按照美国国立卫生研究院实验动物护理和使用指南进行，并经浙江中医药大学附属西溪医院动物护理委员会（杭州）批准。
给饲料喂养1天后，将3周龄大鼠随机分为正常（正常）组，模型（模型）组，多烯磷脂酰胆碱（PPC）组，N-乙酰半胱氨酸（NAC）组，活性炭微胶囊（AC） ）组和活性碳N-乙酰半胱氨酸微胶囊低剂量，中剂量和高剂量组（分别为ACNAC1，ACNAC2和ACNAC3）。正常组饲喂标准饲料，而其他组饲喂HFD（69％的基础饲料，10％的猪油，2％的胆固醇，5％的糖，0.5％的胆酸盐，10％的蛋黄）。粉末，3％的酵母粉和0.5％的十水胺。低剂量，中剂量和高剂量ACNAC组用NAC（20,40和80mg / kg）灌胃给药。NAC和PPC组灌胃给予80 mg / kg NAC，而模型组和正常对照组胃内给予等体积的0.9％生理盐水。分组后，每天一次处理大鼠，连续7周，并在最后一次给药后24小时处死。通过暴露于逐渐增加剂量的异氟烷和二氧化碳（CO 2）使大鼠安乐死2）[ 29 ]。立即收集血液和肝脏组织并储存在-80℃下用于将来的实验。所有的努力都是为了尽量减少动物的数量和他们的痛苦。根据先前/中试实验，大鼠ALT水平的平均值为（57.990±8.431），因此我们估计4只大鼠需要达到P <0.05 的统计学显着性，具有90％的可预测性。
切下切片并脱蜡，在室温下用苏木精溶液染色10分钟，并在1％盐酸 - 乙醇溶液中温育。然后，用自来水清洗切片，用曙红液染色8分钟，并分别用75％，85％，90％，95％，100％和100％的醇溶液分成不同的颜色2分钟。接下来，将切片放入2瓶OT生物澄清器中各10分钟，并用中性胶密封以在显微镜下观察。参考中国肝病协会脂肪肝和酒精性肝病研究组制定的非酒精性脂肪性肝病诊断和治疗指南，了解肝脏脂肪变性程度的标准[ 30]]，其中NAFLD活动得分（NAS）设置为0到8分。
将肝组织固化，脱水，包埋在最佳切割温度化合物（OCT）中，切片（8至10μm厚），固定（冷冻切片重新加热10分钟并用磷酸盐缓冲盐水（PBS）冲洗3次，每次5分钟）染色（将切片在油红O（ORO）液体中孵育15分钟，用PBS冲洗3次，每次5分钟，并在ORO液体中于37℃染色2小时）并进行分化（切片在75中分化） ％酒精2秒，然后用水洗1分钟）; 然后将细胞核染色（Harris苏木精2分钟，用自来水洗涤，在1％盐酸 - 乙醇溶液中分化几秒钟，用自来水洗涤，用氨变蓝并用水洗涤）并密封。
根据试剂盒（南京建成生物工程研究所，南京，中国）的说明测定ALT，AST，TC，TG，HDL-C，LDL-C，FBG和FINS的水平。胰岛素抵抗指数根据公式FBG×FINS / 22.5 [ 31 ]计算。
通过以下步骤测试胰岛素敏感性：从麻醉的大鼠中分离股静脉，插入留置针，用微量注射器（以恒定速率）注射葡萄糖和胰岛素，监测基础血糖和空腹血糖并计算葡萄糖输注速率（ GIR）在60到120分钟之内。较小的GIR代表服务器胰岛素抗性，表明大鼠的胰岛素敏感性。
通过以克为单位称重麻醉大鼠，提取新鲜肝组织并干燥并称重新鲜肝组织的湿重（以克为单位）并根据公式计算肝脏湿重/体重×100％来获得肝脏指数。
①从肝组织中提取DNA，得到的OD 260与OD 280之比为1.7-1.9;
②引物序列列于表1
| 入门 | 序列5'-3' |
|---|---|
| 电话-F | CGGTTTGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTT |
| 电话-R | GGCTTGCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCCT |
| RatDNA肌动蛋白-F | GAGACCTTCAATGTGCCAGCAATGTA |
| RatDNA肌动蛋白-R | GCGAGACACCATCACCACTATCCAAA |
③反应条件和系统：
反应条件包括94℃1分钟，95℃10秒，59℃10秒和72℃秒（40个循环）。
反应系统（20微升）包括10微升2×SYBR预混物，1μl的上游引物，1μl的下游引物，1μl的模板和7微升的DDH 2 O.
④测试结果
①裂解：将良好接地的组织样品加入200μlNP-40缓冲液裂解液中，置于冰上30分钟，并在4℃下以12,000rpm离心20分钟。提取上清液以备使用。
②Amplification
引物序列：
反向引物（ACX）： GCGCGGCTTACCCTTACCCTTACCCTAACC
内部标准（NT）： ATCGCTTCTCGGCCTTTT
36-bp内标控制（TSNT）的底物: AATCCGTCGAGCAGAGTTAAAAGGCCGAGAAGCGAT
TS： AATCCGTCGAGCAGAGTT
③放大条件：25°C，40分钟延长。95°C，5分钟，以使端粒酶失活。30个循环：95℃30秒，52℃30秒，72℃45秒。72°C，10分钟。
④运行丙烯酰胺凝胶：凝胶制备，电泳检测，溴化乙锭染色。
⑤结果分析。
①总蛋白质提取：通过将200mg幼年大鼠肝脏置于1.5ml eppendorf（EP）中，在冰上加入1ml放射免疫沉淀测定（RIPA）裂解液并均质化至完全裂解，离心12,000步骤提取总蛋白质。在4℃下转速5分钟并提取上清液。然后将上清液储存在-80℃的冰箱中。二辛可宁酸（BCA）法用于测试样品的蛋白质浓度; ②通过以下步骤进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）电泳，制备聚丙烯酰胺凝胶，5％堆积凝胶和12％分离凝胶; b，样品应用，即将每个凝胶点的取样量调整为20μg; c，电泳，即60 mA交叉流动电泳; ③电影转换，即100V恒压电泳65分钟; ④过夜停留在5％脱脂奶粉的封闭状态; ⑤一抗反应，即将聚偏二氟乙烯（PVDF）薄膜置于适当浓度（稀释比为1：100）的封闭液中，在室温下振荡器振荡2小时; ⑥洗涤，即弃去封闭液和抗体，用磷酸盐缓冲盐水和吐温-20（PBST）膜冲洗过滤器3次，每次10分钟，每次用Tris缓冲盐水（TBS）洗涤10分钟; ⑦二抗反应，即将PVDF薄膜置于适当浓度的封闭液中，在室温下振荡摇动1小时; ⑧洗涤，即用Tris缓冲盐水和吐温-20（TBST）溶液洗涤3次，每次10分钟，然后用TBS溶液洗涤一次，每次10分钟; 和⑨着色，即需要时制备二氨基联苯胺（DAB）着色液。将PVDF膜洗涤并置于显色反应溶液中3分钟（用于密切观察），如果需要，用水终止反应。用全自动数字凝胶图像分析系统（Shanghai Tanon Technology Co.，Ltd.，Shanghai，China）对该薄膜成像，并用Image J版本1.48（National Institutes of Health，Bethesda，USA）分析结果。
测量数据表示为平均值±标准偏差（SD）。统计分析用SPSS软件版本21（SPSS，Inc.，Chicago，IL，USA）进行。单因素方差分析用于多组的比较，最不显着差异（LSD）方法用于成对比较。P<0.05被认为具有统计学意义。
专业病理学家根据肝组织中H＆E和ORO染色的结果将肝小叶中的肝脂肪变性和炎症分类。H＆E染色结果：正常组显示肝小叶整体结构，中央静脉中心周围肝细胞径向排列，肝细胞边界清晰，中央细胞核明显，肝小叶轮廓清晰（图1A），模型组肝细胞体积明显增加，肝组织出现轻度，中度至重度脂肪变性和气球样变，细胞内充满不同大小的空泡，部分区域出现部分炎性细胞和局灶性坏死（图1B）。）。AC组和模型组表现相似（图1E）。与模型组相比，ACNAC组的肝细胞脂肪变性和炎症程度均有不同程度的降低（图1G和1H）; 而ACNAC1组则不太明显（图1F）。PPC组和ACNAC3组表现相似（图1C）。ORO染色结果：正常组显示淡蓝色肝脏，没有明显的脂滴颜色（图2A）; 而模型组在大多数大鼠中显示红色肝细胞和脂滴的密集分布（图2B）。AC组和模型组表现相似（图2E）。此外，在ACNAC组的肝细胞高剂量组中，红色染料更强（图2H）; 而低剂量和中剂量组较弱（图2F和2G）。PPC组和ACNAC3组表现相似（图2C）。结果表明，模型组达到了NASH等级，而ACNAC组显示出不同程度的下降，这表明ACNAC治疗有利于NAFLD的发展。
非酒精性脂肪性肝炎（NASH）（肝脏脂肪变性和炎症伴肝细胞损伤[气球样]有/无纤维化）[ 57 ]。（A）正常组，（B）模型组，（C）多烯磷脂酰胆碱基，（D）N-乙酰半胱氨酸对照组，（E）活性炭释放微胶囊对照组，（F）N-乙酰半胱氨酸活性炭释放微胶囊低剂量组，（G）N-乙酰半胱氨酸活性炭释放微胶囊中剂量组，（H）N-乙酰半胱氨酸活性炭释放微胶囊高剂量组。
（A）正常组，（B）模型组，（C）多烯磷脂酰胆碱组，（D）N-乙酰半胱氨酸对照组，（E）活性炭释放微胶囊对照组，（F）N-乙酰半胱氨酸活性炭释放微胶囊低剂量组，（G）N-乙酰半胱氨酸活性炭释放微胶囊中剂量组，（H）N-乙酰半胱氨酸活性炭释放微胶囊高剂量组。
正如预期的那样，7周高脂肪饮食（HFD）喂养诱导大鼠早期肝脏NAFLD病理，包括脂肪肝和肝脏损伤，其表现为血浆ALT，AST，TC，TG，LDL-C水平升高（图3F）和血浆HDL-C水平分别降低（图3E）。与模型组相比，ACNAC，特别是高剂量组PPC，显着降低AST和ALT的活性以及TC，TG和LDL-C的含量，而HDL-C的含量迅速升高（图3） 。与NAC组相比，ACNAC3显着降低AST和ALT活性以及LDL-C含量，而HDL-C含量迅速升高（图3））。此外，ACNAC高剂量组和PPC组之间的AST，ALT，TC，TG和LDL-C水平没有观察到显着差异（图3）。总之，这些结果表明ACNAC改善肝脏病理学（H＆E和油红O染色），ALT，AST和其他血浆指数。
（A）ALT，（B）AST，（C）TC，（D）TG，（E）HDL-C，（F）LDL-C。如材料和方法中所述测定ALT，AST，TC，TG，HDL-C和LDL-C。条形表示每个实验组获得的结果的平均值±SD。* P<0.05，与模型组，＃P <0.05，相对于所述NAC组，如通过方差和LSD方法的一个方式分析来确定。ALT，丙氨酸转氨酶; AST，天冬氨酸转氨酶; FBG，空腹血糖; FINS，胰岛素抵抗。
NAFLD被认为是代谢综合征（MS）的肝脏表现，因为肝脏脂肪积聚是全身性胰岛素抵抗和高胰岛素血症的结果。胰岛素在NAFLD的进展中起着重要作用，然而，NAFLD中胰岛素抵抗的确切机制仍有待明确界定。上述动物研究的观察结果促使我们研究了NAFLD发展过程中的空腹血糖（FBG），空腹胰岛素（FINS），胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）和肝脏指数（LI）。有趣的是，我们观察到相比于NAC基，ACNAC3显著降低HOMA-IR，和李，但增加了GIR 60〜120（图（Figs44和and5C）5C进一步分析表明，ACNAC治疗引起严重的生物学效应，如降低血糖，调节脂质代谢，改善胰岛素抵抗，降低肝脏指数。因此，值得进一步研究ACNAC在NAFLD中的作用。此外，在FBG，鳍，HOMA-IR，和ACNAC高剂量和PPC组（图之间LI水平没有观察到显著差异（Figs44和and5C5C）。
（A）FBG，（B）FINS，（C）HOMA-IR，（D）GIR 60~120。如材料和方法中所述测定FBG，FINS，HOMA-IR和GIR 60~120。条形表示每个实验组获得的结果的平均值±SD。* P <0.05，与模型组，＃P <0.05，相对于所述NAC组，如通过方差和LSD方法的一个方式分析来确定。FBG，空腹血糖; FINS，空腹胰岛素; HOMA-IR，胰岛素抵抗指数; GIR 60~120，葡萄糖输注率（GIR）在60~120 min。
A，端粒长度; B，端粒酶活性; C，肝脏指数。正常，正常组; 模型，模型组; PPC，多烯磷脂酰胆碱基; NAC，N-乙酰半胱氨酸对照组; AC，活性炭释放微胶囊对照组; ACNAC1，N-乙酰半胱氨酸活性炭释放微胶囊低剂量组; ACNAC2。N-乙酰半胱氨酸活性炭释放微胶囊中剂量组; ACNAC3，N-乙酰半胱氨酸活性炭释放微胶囊高剂量组。条形表示每个实验组获得的结果的平均值±SD。* P <0.05，与模型组，＃P <0.05，相对于所述NAC组，如通过方差和LSD方法的一个方式分析来确定。
在肝损伤的情况下，缩短的端粒长度导致肝细胞的再生能力受损和肝硬化发展增加。与此一致，端粒酶活性与NAFLD进展相关。鉴于端粒和端粒酶在肝损伤中的重要性，更好地了解端粒和端粒酶生物学可能会转化为NAFLD患者的新治疗策略。因此，未来的研究应评估端粒和端粒酶作为NAFLD发展的预后标志物的有效性。为了进一步证实这一观察结果，QPCR用于测量端粒长度和TRAP以测试NAFLD发展中肝细胞的端粒酶活性。有趣的是，我们观察到与正常组相比，模型组端粒mRNA水平显着下降，端粒酶活性显着下降; 进一步的研究表明，与NAC组相比，ACNAC3显着增加端粒的mRNA水平，并显着促进端粒酶活性（图5A和5B）。总之，这些结果表明ACNAC在NAFLD发展中缩短了端粒长度并降低了肝细胞的端粒酶活性。此外，在ACNAC高剂量和PPC组之间的端粒长度，端粒酶活性没有观察到显着差异（图5A和5B）。
随着生活水平的提高和生活方式的改变，肥胖和糖尿病的发病率增加，因此中国的NAFLD发病率也有所增加。虽然NAFLD的发病机制尚不清楚，但有证据表明肝细胞凋亡及相关因子如Fas / FasL和Bcl-2 / Bax在NAFLD的发生发展中起重要作用。在本研究中，我们在NAFLD大鼠模型断奶期建立了改良的高脂饮食，观察肝组织中Bcl-2，Bax，Caspase-3的表达，以进一步阐明它们在肝病发病机制中的作用和关系。 。与对照饮食比较，HFD消耗导致Bcl-2，Bax和Caspase-3显着增加，但Bcl-2 / Bax减少。与此同时，我们发现该研究与NAC组相比，ACNAC3组Bax明显降低，但Bcl-2和Bcl-2 / Bax升高。我们的结果清楚地表明，ACNAC喂养抑制了HFD消耗对Bcl-2，Bax和Caspase-3以及Bcl-2 / Bax表达的影响（图6）。此外，在ACNAC高剂量和PPC组之间未观察到Bcl-2，Bax和Caspase-3的显着差异（图6）。
肝组织相对蛋白含量为（A）Bcl-2，（B）Caspase-3和（C）Bax。与模型组相比，ACNAC组Bax和Caspase-3的表达下降，但Bcl-2表达增加，Bars表示每个实验组获得的结果均值±SD。* P <0.05，与模型组，＃P <0.05，相对于所述NAC组，如通过方差和LSD方法的一个方式分析来确定。
在中国和世界上许多其他地方，儿童专用药通常不足。由于儿童被告知服用较小剂量的成人药物，因此存在许多安全隐患。结合城乡父母之间的差异以及缺乏关于成人药物在儿童中的适用性的相关临床研究，医生在为儿童开处方时必须非常小心。在有限的合适品种中，中国儿童的剂型和规格值得关注。
之前关于儿童NASH的研究优先考虑与脂质代谢，胰岛素抵抗，氧化应激相关的机制，但缺乏对端粒的了解。在本研究中，我们研究了ACNAC对NASH幼年大鼠端粒长度和端粒酶活性的影响以及Bcl-2，Bax和Caspase-3的表达机制。
端粒和端粒酶在肝病的发病和进展中起重要作用，并且与潜在的病因无关。然而，端粒损耗和细胞衰老的作用可能在NAFLD中被放大，其中遗传风险因素和衰老对先天性肝损伤的易感性与获得性危险因素的结合有重大影响[ 32]。端粒是在线性染色体末端重复的DNA序列，并在真核生物染色体末端形成特殊结构。端粒可以防止正常染色体末端之间的融合并确保每条染色体的完整性。在正常人体细胞中，当细胞分裂时，端粒会缩短。由于DNA复制的方向是5'至3'方向，因此每当DNA复制时端粒缩短。体外研究表明，50至200个核苷酸各自的时间损失的细胞分裂，和大约4000个核苷酸的丢失，直到每个小区[死亡33，34]。因此，端粒长度（称为细胞寿命的“有丝分裂时钟”）反映了细胞复制历史和复制潜力[ 35 ]。因此，端粒不仅关系到染色体的稳定性，而且也涉及到在细胞衰老和死亡，以及在发生和脂肪肝，肿瘤，糖尿病，代谢综合征等疾病[开发28，36 ]。
端粒酶是一种负责细胞端粒延伸的酶，是典型的核蛋白逆转录酶，因为端粒DNA序列可以添加到真核染色体的末端[ 37 ]。端粒在维持不同物种的染色体稳定性和细胞活性中起重要作用。端粒酶可延长端粒，从而改善体外细胞的增殖能力。此外，端粒酶可以很好地保持基因组的完整性，端粒稳定性，细胞的长期活性。端粒酶通过弥补DNA复制的缺陷起作用，这可以防止细胞分裂导致的端粒丢失并增加细胞分裂的数量。
以前的研究表明[ 38 ]端粒酶依赖于端粒的生理功能，可能促进干细胞的活化，抗凋亡和抗氧化应激，从而增强细胞活力。此外，肝纤维化过程中肝细胞中的端粒缩短，因此如果端粒酶活性更高，则肝细胞可以再生。因此，可以通过改善肝细胞中端粒酶的活性来减少或锁定肝纤维化的形成。
PPC胶囊的主要成分是PPC，B族维生素，E族维生素。多烯磷脂对于身体的生理过程是必需的[ 39]。它可以与肝细胞及其细胞器结合，成为细胞生物膜的一部分。此外，它可以修复受损肝细胞膜的生物结构，以维持肝细胞膜的活动性和稳定性，并恢复受损的肝细胞和转氨酶。此外，它可以降低氧化应激和脂质过氧化作用，抑制肝细胞凋亡，炎症反应，显著降低转氨酶水平之后减少肝星状细胞的活化，有效地防止肝细胞变性和炎症性纤维化[ 40 - 42]，从而保护肝细胞。此外，它还可以影响体内脂质代谢过程，促进体内多种细胞溶解质粒的形成，使体内脂肪迅速分解，最终抑制体内脂肪的积累。因此，PPC起着许多方面，包括抗发炎，抗氧化，和免疫调节功能[作用43，44 ]。在临床上，PPC被广泛用于治疗各种类型的肝病[ 45 ]。PPC的处理对NAFLD良好的治疗效果和无不良反应中观察到[ 46，47 ]。因此，PPC用作阳性对照药物。
我们的结果表明，与模型组相比，ACNAC组，尤其是高剂量组，降低ALT和AST的活性以及TC，TG，LDL-C，FBG和FINS以及HOMA-IR和肝脏的水平。指数。此外，HDL-C和GIR 60~120的水平增加。H＆E和ORO染色显示，与模型组相比，ACNAC组肝脏脂肪变性和炎症的肝脏显着降低。ACNAC组，特别是高剂量组，延长端粒长度并增加端粒酶活性。我们发现，与NAC相比，ACNAC3在治疗NAFLD方面具有更好的疗效。研究表明，肝细胞凋亡在NAFLD进展为非酒精性脂肪性肝炎（NASH），肝纤维化，肝硬化和肝癌方面起着关键作用[48，49 ]。肝细胞凋亡的发生主要是由死亡受体信号转导途径，线粒体信号传导途径，和内质网的信号传导途径[调节50，51 ]。
虽然NAFLD的发病机制仍不十分清楚，有证据表明，肝细胞凋亡相关因子如Bcl-2 / Bax蛋白，和Caspase NAFLD的发生都起着重要的作用和发展[ 52，53 ]。
为了研究凋亡相关因子是否参与端粒长度和端粒酶活性的变化，我们探索了Bcl-2基因和Caspase家族。Western blot分析表明，与模型组相比，ACNAC组Bax和Caspase-3蛋白表达相对较低，Bcl-2表达较高。这些发现与先前报道的结果一致。Bcl-2是决定肝细胞凋亡的关键基因，因为它可能通过激活肝细胞中的一系列下游基因而在抗凋亡中发挥重要作用。当Bcl-2表达增加时，肝细胞凋亡可能受到抑制。Bax基因表达是在凋亡的过程中的关键枢轴54，55]。当Bax蛋白占优势时，Bcl-2与Bax的比例称为“细胞凋亡转换”，因为细胞凋亡发生。Caspase家族是细胞凋亡过程中的重要蛋白酶，最终通过激活Caspase实现。此外，Caspase家族被激活为级联反应，其中Caspase-3是负责调解和执行死亡指令的最关键的蛋白酶。李等人。[ 56 ]证明Caspase-3激活的干预抑制了细胞凋亡的发生。ACNAC通过上调Bcl-2的表达和下调Bax和Caspase-3的表达来抑制肝细胞凋亡。因此，填充到微胶囊中的N-乙酰半胱氨酸保护大鼠中的NAFLD并且对NAFLD的治疗具有积极意义。
该过程可能与端粒长度和端粒酶活性的控制机制有关，需要进一步探讨。因此，可以主要得出结论：ACNAC可以预防断奶期诱导的SD大鼠患NAFLD，为儿童NAFLD的研究提供理论依据。
因此，上述结果表明，在肝组织中，HFD参与NAFLD的功能障碍，并且改善功能可能有助于ACNAC在NAFLD中的肝保护作用。因此，以ACNAC为重点的研究具有重要意义。我们相信这项研究将为临床用药提供理论依据，并将有助于降低中国NAFLD的发病率。
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